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細胞培養的注意事項
發布時間:2021-08-13   點擊次數:319次


        培養前的工作準備充分

        包括耗材的處理、試劑的配置,無菌檢驗等等。

        玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿(細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,160℃ 干烤 2 h 待用。

        試劑配置。細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調節。

        無菌檢驗。主要采用過濾除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌:如 PBS、D-Hank's等。


        試劑分裝保存

        包括營養液、胰酶、血清等。

        血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃,如果一次無法用完一瓶,可將 40~50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌,不需再無菌過濾。若發現血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養基內一起過濾,勿直接過濾血清。(一般情況下不影響細胞培養)


       瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。


        熱滅活是指 56℃,30 分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后,將血清放入,待溫度升高到 56℃ 后計時,一般 5 分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。


        無菌意識要強

        實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后,才開始實驗操作。


        每次操作只處理一株細胞株,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。


        無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區域,一般勿在邊緣區域操作。


        小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約 45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。


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